Le cœur de la conception des laboratoires de PCR:
1, disposition du laboratoire de PCR
Le laboratoire de test d'amplification PCR est divisé en trois zones de travail distinctes en principe: zone de stockage et de préparation des réactifs, zone de préparation des échantillons, zone d'analyse des produits d'amplification et d'amplification. Afin d'éviter toute contamination croisée, l'entrée dans chaque zone de travail doit suivre strictement une seule direction, c'est-à-dire uniquement depuis la zone de stockage et de préparation des réactifs → la zone de préparation des échantillons → la zone d'analyse des produits d'amplification et d'amplification. Le transfert des réactifs et des échantillons entre chaque zone expérimentale doit être effectué à travers la fenêtre de transfert.
2. Conception et contrôle de la pression du système de climatisation et de ventilation du laboratoire
Le laboratoire de PCR n'a pas d'exigences strictes en matière de niveau de purification, mais afin d'éviter la possibilité de contamination croisée entre diverses zones expérimentales, il est conseillé d'adopter une forme de distribution complète et d'organisation de l'air d'échappement complet. Dans le même temps, le rapport entre l'alimentation et l'évacuation d'air doit être strictement contrôlé pour garantir les exigences de pression de chaque zone expérimentale.
(1) Zone de stockage et de préparation des réactifs
Les principales opérations dans ce domaine expérimental sont la préparation des réactifs de stockage, la distribution des réactifs et la préparation du mélange réactionnel principal. Les réactifs et les matériaux utilisés pour la préparation des échantillons doivent être transportés directement dans cette zone et non à travers d'autres zones. Les matières premières réactives doivent être stockées dans cette zone et préparées dans les réactifs de stockage requis dans cette zone. Pour le contrôle de la pression du flux d'air, cette zone doit maintenir une légère pression positive à l'extérieur.
(2) Zone de préparation des échantillons
Les principales opérations dans ce domaine sont la conservation des échantillons, l'extraction des acides nucléiques (ARN, ADN), le stockage et l'ajout au tube de réaction d'amplification et la mesure de la synthèse d'ADN. Le gradient de pression dans cette zone doit être une pression positive par rapport à la zone adjacente pour éviter que la pollution par aérosol ne pénètre dans la zone depuis la zone adjacente. De plus, étant donné que la contamination causée par les aérosols peut se produire pendant les opérations de chargement des échantillons, il faut éviter de marcher inutilement dans cette zone.
(3) Zone d'analyse des produits d'amplification et d'amplification
Les principales opérations dans ce domaine sont l'amplification de l'ADN et la détermination des fragments amplifiés. De plus, l'addition du modèle d'ADN préparé (à partir de la zone de préparation de l'échantillon) et la préparation du mélange réactionnel principal (à partir de la zone de stockage et de préparation des réactifs) dans un mélange réactionnel peuvent également être effectuées dans cette zone. Les exigences en matière de gradient de pression dans cette zone sont les suivantes: pression négative par rapport à la zone adjacente pour éviter les fuites d'aérosol de cette zone. Pour éviter la pollution causée par les aérosols, il faut minimiser les marches inutiles dans la zone. Les opérations individuelles telles que l'ajout d'échantillons doivent être effectuées dans un banc ultra-propre.
3. Prévention et maîtrise de la pollution
La question centrale de la conception des laboratoires de PCR est de savoir comment éviter la contamination. Dans le travail réel, les types de pollution suivants sont courants: contamination des produits amplifiés; contamination de l'ADN génomique naturel; contamination des réactifs et contamination entre les échantillons. Parce qu'une fois la pollution se produit, l'expérience doit être arrêtée jusqu'à ce que la source de la pollution soit trouvée, et le résultat de l'expérience doit être invalidé et l'expérience doit être répétée. Par conséquent, il est long et fastidieux de trouver la source de pollution autour du laboratoire après la pollution, et de gaspiller de la main-d'œuvre et des ressources matérielles. Par conséquent, pour éviter la pollution, la première priorité devrait être la prévention et non l'élimination.
(1) Division stricte de la zone de travail
Le cadre de chaque zone expérimentale est raisonnable; chaque zone expérimentale doit avoir des marques évidentes (comme un numéro de maison accrocheur ou une couleur de fond différente, etc.) pour éviter toute confusion entre l'équipement et les réactifs dans différentes zones expérimentales.
(2) Paramètres système raisonnables
Réglages raisonnables du système de climatisation et de ventilation, essayez d'utiliser des systèmes de climatisation à plein débit et à évacuation complète; contrôle strict de la pression du flux d'air pour assurer différentes exigences de pression dans différentes zones expérimentales.
(3) Fonctionnement standard
Les techniciens du laboratoire d'essais d'amplification doivent suivre une formation en cours d'emploi et ce n'est qu'après avoir été qualifiés qu'ils peuvent être engagés dans des essais d'amplification génétique clinique; pendant l'opération expérimentale, l'opérateur doit porter des gants et les changer fréquemment. De plus, l'utilisation de bouchons jetables dans l'opération est également une mesure efficace pour éviter la pollution; le travail de nettoyage est opportun et correct. Une fois le travail expérimental terminé, la zone doit être nettoyée immédiatement. En plus du liquide de désinfection conventionnel pour essuyer et désinfecter la surface ou la désinfection par irradiation aux rayons ultraviolets, certains équipements expérimentaux doivent également être passés à l'autoclave.
(4) Gestion stricte
Contrôler strictement le personnel entrant et sortant du laboratoire. Le personnel qui n'a rien à voir avec l'expérience n'est pas autorisé à entrer et à sortir du laboratoire à volonté. Si possible, installez des passages et des portes indépendants pour entrer et sortir de toute la zone expérimentale; minimiser les déplacements inutiles dans la zone expérimentale pour réduire la possibilité de contamination croisée; produits d'amplification La zone d'analyse est la principale source de contamination des produits amplifiés. Les déchets liquides ne peuvent pas être déversés dans le laboratoire. Il doit être trempé et désinfecté dans un désinfectant et jeté hors du laboratoire. Les matériaux jetables tels que les embouts usagés doivent également être désinfectés. Après trempage et désinfection, traitement uniforme, tel que l'incinération, etc. la zone d'analyse des produits d'amplification peut utiliser certaines mutations génétiques et substances toxiques, et une attention particulière doit être accordée à la protection de la sécurité du personnel expérimental.
(5) Installations de soutien de laboratoire complètes
Des installations complètes de support de laboratoire sont nécessaires pour assurer le travail expérimental. L'équipement et les instruments correspondants doivent être équipés en fonction des différents contenus expérimentaux de chaque laboratoire, tels que des bancs ultra-propres, des centrifugeuses, des échantillonneurs, etc.